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Detection and measurement of hydrogen peroxide:

过氧化氢（Hydrogen peroxide, H₂O₂）特异性荧光探针专题

专题关键词：

ROSGreen^TM H2O2 Probe；BES-H2O2-Ac；hydrogen peroxide (H2O2) 过氧化氢；HYDROP-EX；Amplex Red reagent；Peroxidase 过氧化物酶；

专题背景：

活性氧（ROS）比如超氧阴离子（O2-.），过氧化氢（H2O2）和羟基自由基（HO .）是各种疾病病理发展中的重要调节剂。DCFH和DCFH-DA普遍用作荧光探针测定细胞来源的过氧化氢（H2O2），但这些化合物最大的缺陷在于对H2O2的选择性极其弱。

为此，很多公司开发特异性的过氧化氢（H2O2）探针，以阐明H2O2导致疾病相关的细胞反应和动力学功能。

一、高选择性过氧化氢探针（BES-H2O2-Ac，BES-H2O2，from wako chemical）

Wako chemical公司开发两款BES-H2O2，分别检测细胞来源的H2O2和细胞非渗透性的H2O2，具高选择性。

1）两款探针作用机理如下：

2）两款探针的应用示例：

图：BES-H2O2检测Jurkat T细胞的荧光成像和同一视野下的相位对比成像图。Jurkat T细胞用含50µM BES-H2O2-Ac的培养基孵育1h。之后，其中一组细胞用含5mM 丁酸（H2O2产生的刺激物）的培养基处理，而另一组用正常培养基（不含H2O2产生的刺激物）处理，分别培养1h。（图片来源: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences）。

3）两款探针的订购信息：欢迎来电咨询021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

产品优势：

□     高度选择性结合H2O2;

□     BES H2O2-Ac具细胞膜渗透性；

□     检测细胞来源的H2O2；

□     适用于荧光成像；

二、高选择性过氧化氢探针（ROSGreenTMH2O2 Probe过氧化氢荧光探针，from MKBio）

懋康生物（MKBio）开发一款细胞膜渗透性的过氧化氢特异性探针：ROSGreenTMH2O2 Probe。

1）  探针描述

过氧化氢（Hydrogen peroxide, H2O2）是一种反映氧代谢副产物，用于许多氧化应激相关态的关键调节剂，参与人体大量的生理和病理活动，比如哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、神经性衰退疾病和唐氏综合征等，但目前对H2O2生成、积累、运输和功能的分子机制仍了解很少，最大的限制在于缺乏灵敏且特异性H2O2探针，用于活细胞研究。目前能得到的H2O2反应性探针的缺陷包括1）来自其他ROS比如过氧亚硝基阴离子（ONOO-）、过氧化基（ROO•）、超氧化物（•O2–）的背景荧光干扰；2）对外源活化酶的需求；水缺乏水溶性或不兼容于水溶体系；4）以及紫外区域的激发光谱特征等。

本ROSGreenTMH2O2Probe正是克服以上缺陷开发的一款过氧化氢（H2O2）选择性探针。探针本身无荧光，可见光区域内无吸收峰。一旦接触H2O2，瞬间激发荧光增加并伴随可见波长吸收带的生成（Ex/Em= 490/514nm）。因其二元的吸收/发射荧光反应，此探针具有较大的动力学范围。与相似的ROS比如O2–，NO，或OCl-相比，ROSGreenTMH2O2Probe对H2O2呈现出＞100倍（100-fold）的选择性。

2）  应用示例

图. Costar 黑色96孔培养板内CHO-K1活细胞用ROSGreenTMH2O2Probe的染色图。图A：对照细胞；图B：用H2O2（100μM）处理5min后的细胞；

3）订购信息：欢迎来电咨询021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

产品优势：

□     高度选择性结合H2O2;

□     ROSGreenTMH2O2 Probe具细胞膜渗透性；

□     检测溶液或细胞来源的H2O2；

□     适用于荧光成像和流式细胞分析；

三、选择性过氧化氢探针（ADHP，Amplex®Red过氧化氢探针，from MKBio）

懋康生物（MKBio）供应的10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪，以商标名Amplex®Red在市场上销售，是目前为止最灵敏和稳定的荧光探针用来检测HRP和H2O2。

1）  基本描述

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪，以商标名Amplex®Red在市场上销售。ADHP是一种高度灵敏和稳定的过氧化物酶底物，选择性检测过氧化氢（H2O2）。存在辣根过氧化物酶（HRP）的体系中，这一基本无色和非荧光的ADHP与H2O2以1：1的化学定量比反应，生成强红色荧光的试卤灵（Resorufin），可通过荧光光度计和酶标仪分析结果。许多酶反应能产生H2O2，因此，ADHP能够用在偶联酶促反应中检测许多不同酶的生物活性。

2）  工作原理

图. 使用ADHP进行偶联酶促反应的工作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢（H2O2），通过辣根过氧化物酶（HRP）催化ADHP反应生成强荧光试卤灵（Resorufin）。

3）  常见应用

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前为止最灵敏和稳定的荧光探针用来检测HRP和H2O2。

A）  ADHP普遍用来检测许多免疫实验中的HRP；

B）  ADHP用来检测微量的H2O2；

Zhou, M.等研究表明ADHP（Amplex®Red）检测过氧化物酶活性，最少能检测1×10−5U/mL HRP；或H2O2，最少能检测50nM H2O2。【文献来源：Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】

4）  订购信息：欢迎来电咨询021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

四、过氧化氢清除剂（Hydrogen Peroxide Scavenger from MKBio）

五、过氧化氢活性检测试剂盒（Hydrogen Peroxide assay kit）

懋康生物作为AAT bioquest在中国的授权代理商，提供该品牌的优质过氧化氢活性检测试剂盒，比色法（Cat#: 11500）和荧光法（Cat#:11501），请根据实验具体需求以及现有检测仪器来选择合适产品。

1）试剂盒特征（比色法，Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

测定对象：溶液和细胞裂解液

检测原理：使用Amplite™ IR过氧化物酶底物来定量检测溶液和细胞提取物内的过氧化氢水平。一旦过氧化氢氧化，无色的Amplite™ IR产生强蓝色产物，在pH 4-10范围内不受pH影响。

测定仪器：吸光度测定酶标仪（650nm）

结果展示：

2） 试剂盒特征（荧光法，Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

测定对象：溶液和细胞裂解液

检测原理：使用Amplite™ red过氧化物酶底物来定量检测溶液和细胞提取物内的过氧化氢水平。

测定仪器：荧光酶标仪（540nm/590nm）

结果示例：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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